TRIS-HCL緩沖液很穩(wěn)定,可被廣泛用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備,它的生理體液的相容性好,與鈣,鎂離子不會(huì)形成沉淀,相反,磷酸鹽與鈣、鎂離子會(huì)產(chǎn)生沉淀。而且相同pH、相同濃度的TRIS-HCL緩沖液的離子強(qiáng)度比磷酸鹽緩沖液的離子強(qiáng)度低。這對(duì)酶類測(cè)定尤為重要。因?yàn)榇箅x子強(qiáng)度易致有些酶失活。因此,有時(shí)用TRIS-HCL代替磷酸鹽緩沖液,效果更好。
但TRIS-HCL緩沖液的pH受溫度影響大。一旦溫度改變,PH將發(fā)生明顯變化。而致酶活性改變,這一問題尚未引起臨床檢驗(yàn)界足夠的注意。為此,我們對(duì)TRIS-HCL緩沖液的溫度系數(shù)進(jìn)行測(cè)定并對(duì)實(shí)用價(jià)值作初步討論。下面實(shí)驗(yàn)中用到的Tris試劑為德生科技公司所研發(fā)生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)過程:將TRIS-HCL緩沖液放人37℃水浴箱中水浴30min。蒸餾水,定標(biāo)液仍置于室溫中。將溫度旋鈕置于37℃,取出平衡溫度后的緩沖液。以室溫下的蒸餾水調(diào)零,室溫下的混合磷酸鹽定標(biāo)(37℃時(shí)pH為6。84),立即測(cè)定TRIS-HCL緩沖液的pH。緩沖液置室溫中待溫度降至23℃時(shí)。以室溫的蒸餾水調(diào)零。室溫的混合磷酸鹽定標(biāo)(23℃時(shí)pH為6。86),再立即測(cè)定其相應(yīng)的pH。溶液繼續(xù)置室溫中。待溫度降至室溫對(duì)。再調(diào)溫度旋鈕。定標(biāo)并測(cè)定室溫時(shí)的pH。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:按照以上方法測(cè)得37℃的pH比23℃的pH平均低0。18。比l2℃時(shí)的pH平均低0。32,溫度變化對(duì)緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。
可見,TRIS-HCL緩沖液的pH受溫度變化影響較大,用不同方法測(cè)定時(shí),變化值不同,兩種溫度 (37℃,23℃) 的 pH 值變化,跟測(cè)定方法沒有太大關(guān)系,故我們推測(cè),若要測(cè)定溶液在某溫度下的pH值。必須不僅將酸度計(jì)的溫度補(bǔ)償值也要將所有各種溶液及蒸餾水一并調(diào)節(jié)到測(cè)定溫度。